1)取组织,加入10ml Buffer A 于冰上充分匀浆。
2)闯6-贬颁离心机800谤辫尘,4℃离心10尘颈苍后,所得上清液转入超速。
3)100000g,4℃离心1hr。弃去上清,沉淀用适量的 Buffer B重悬,冰上孵育2hr后分装至EP管,台式高速冷冻离心机10000rpm,4℃离心30min。
4)收集所得上清液即为膜组份。
Buffer A:0.32M 蔗糖,5mM Tris-HCl(PH 7.5),120mM KCl,1mM EDTA,1mM EDTA, 0.2mM PMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin。冰上预冷。
Buffer B:20mM HEPES(PH 7.5),10%甘油,2% Triton X-100, 1mM EDTA, 1mM EDTA, 0.2mM PMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin。 冰上预冷。