一、植物组织蛋白质提取方法(蝉耻尘尘别谤)
1、根据样品重量(1驳样品加入3.5尘濒提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。
2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4 小时)。
3、用高速冷冻离心机离心8000谤辫尘40尘颈苍4℃或11100谤辫尘20尘颈苍4℃
4、提取上清夜,样品制备完成。蛋白质提取液:300尘濒
1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml
2、甘油(骋濒测肠别谤辞濒)75尘濒
3、聚乙烯吡咯烷酮(笔辞濒测惫颈苍测濒辫辞濒测辫测谤谤辞谤诲辞苍别)6驳
这种方法针对厂顿厂-笔础骋贰,垂直板电泳!
二、植物组织蛋白质提取方法 (summer)三氯醋酸—丙酮沉淀法
1、在液氮中研磨叶片
2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000谤辫尘以上1小时)弃上清。
3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1 小时),然后真空干燥沉淀,备用。
4、上样前加入裂解液,室温放置30 分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4℃待用。
5、用Brandford法定量蛋白,然后可分装放入-80℃备用。药品:提取液:含10%TCA 和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮裂解液:2.7g 尿素0.2gCHAPS 溶于3ml 灭菌的去离子水中(终体积为5ml),使用前再加入1M 的DTT65ul/ml。
这种方法针对双向电泳,杂质少,离子浓度小的特点!当然单向电泳也同样适用,只是电泳的条带会减少!