为了从细胞混合物中分离出特殊类型的细胞,首先应该选择能够区分所需细胞与其它细胞的方法,根据分离后回收的细胞百分数和细胞活性评价细胞分离步骤的有效性。细胞分离过程一般分步进行。
第一步,粗分离。由于细胞的组成比较复杂,可先分离出理化性质相近的细胞。如根据密度差,用低速冷冻离心机等密度区带离心把血细胞分成两层,上层含单核白细胞和嗜碱细胞等,下层含红细胞和粒细胞。也可以用低速冷冻离心机差速离心进行粗分离。有些实验仅作粗分离就可以满足要求。
第二步,把粗分离后的细胞用低速冷冻离心机速率区带离心、等密度区带离心或淘洗离心进一步进行分离,把沉降系数和密度差异较大的细胞分开。
第三步,精分离。根据实验目的,采用高分辨率的分离方法,如长梯度柱可使细胞亚群和不同周期的细胞进一步得到分离。